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293t贴壁要多久

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293T细胞转染病毒包装及肿瘤细胞转染中好用的转染试剂?比较好的推荐谢谢大家! , 如何养293、293T系列的细胞? ...

有人对293T细胞中的SV40大T抗原有研究么: 293细胞株插入SV40T-抗原的温度敏感基因后产生的高转染效率的衍生株称为293T,它已被广泛地用于逆转录病毒生产,基因表达和蛋白生产,细胞中含有腺病毒,需在二级生物安全柜中进行操作

转染后293t细胞长满了怎么办: 转染应该有标记的吧?

有抗生素标记的话直接用药杀吧,要是有荧光标记的话,你看下转染效率怎么样,高的话可以收了,实在不行,可以分个盘。

如何在hek293tcells 上表达受体: 293T是293的衍生株 来源于人肾脏细胞,含有腺病毒。可以表达E1A蛋白 S40大T抗原 含有S40复制起始点和启动子区的质粒可以复制。
myc基因是一种多物质调节基因,抑制细胞分化,应该是没有高度分化的细胞内就都有。
目前认为胃癌、 癌、结肠癌、宫颈癌、何杰金氏病及头部肿瘤等都有myc基因的扩增或过度表达.。
239T的本底myc水平很低的,你拿没有转过的作对照就可以消除影响。
这么专业的问题来百度问……

293细胞是来源于人胚肾细胞吗: 1.养293细胞和293T一样。以293T为例,预先准备3个T150瓶的293T细胞,培养基为DMEM+10%FBS,1%Glutamax,1%青霉素-链霉素。2.将细胞分到12分到12个T150瓶中,每瓶的细胞密度是8×106个。3.第二天,镜下检查细胞。细胞融合度应大致为30-40%,分布均匀。4.转染前1小时,取出细胞板,去除原有细胞培养基,加入20ml的Opti-MEM培养基,将细胞送回培养箱。5.取两支无菌的50ml离心管,其中一支中加入252μgpNL-EGFP/CMV/WPREDU3载体质粒,168μgpCD/NL-BH*DDD包装质粒和84μgpLTR-G质粒,用Opti-MEM培养基补齐到18ml。另一支中加入500μlTrans-EZ溶液和17.5mlOpti-MEM培养基,用电动移液器轻轻混匀。将Trans-EZ稀释液滴加到质粒管中,边加边轻轻晃匀。关键步骤:推荐使用Qiagen质粒大抽试剂盒或相当的试剂盒所制备的质粒。6.室温孵育20分钟,使DNA和Trans-EZ充分结合形成转染复合体。7.取1支5ml的移液管,将得到的DNA-Trans-EZ复合体均匀滴加入到细胞培养板中,每板3ml。来回晃动培养板,混匀后放回到5%二氧化碳培养箱。每一皿细胞培养盘不要超过6盘。8.6小时后,移去细胞上清,更换为17ml的DMEM完全培养基。9.转染后一天观察细胞,所有的细胞应当都是健康的并且密度接近60-80%。如果所转染质粒带有GFP荧光,那么这时候可以看到大于95%的细胞都是带有荧光的。10.将细胞送回培养箱继续培养2天(36-48小时)。在这个过程中,细胞会逐渐融合形成多核体,大多数的细胞依然贴壁。11.收集所有的上清,分装到50ml离心管中。124℃,500g离心10分钟,除去脱落的细胞和大的细胞碎片。13总的上清约为204ml,用250-ml0.45μmPVDF过滤装置过滤。如果发现滤膜被堵住,表现为过滤速度变慢,更换新的滤器。

293T细胞转染病毒包装及肿瘤细胞转染中好用的转染试剂?: 目前大多数人都是使用的是lipofectamin 2000!!这个试剂转染效果比较好,特别是病毒包装时需要用到三种质粒,这样对转染试剂要求就要高一些

如何养293、293T系列的细胞?: 1. 养293细胞和293T一样。以293T为例,预先准备3个T150瓶的293T细胞,培养基为DMEM + 10% FBS,1% Glutamax ,1% 青霉素-链霉素。

2. 将细胞分到12分到12个T150瓶中,每瓶的细胞密度是8×106个。

3. 第二天,镜下检查细胞。细胞融合度应大致为30-40%,分布均匀。

4. 转染前1小时,取出细胞板,去除原有细胞培养基,加入20ml的Opti-MEM培养基,将细胞送回培养箱。

5. 取两支无菌的50ml离心管,其中一支中加入252 μg pNL-EGFP/CMV/WPREDU3 载体质粒,168 μg pCD/NL-BH*DDD
包装质粒和84 μg pLTR-G质粒,用Opti-MEM培养基补齐到18ml。另一支中加入500 µl Trans-EZ溶液和17.5 ml
Opti-MEM培养基,用电动移液器轻轻混匀。将Trans-EZ稀释液滴加到质粒管中,边加边轻轻晃匀。

关键步骤:推荐使用Qiagen质粒大抽试剂盒或相当的试剂盒所制备的质粒。

6. 室温孵育20分钟,使DNA和Trans-EZ充分结合形成转染复合体。

7.
取1支5ml的移液管,将得到的DNA-Trans-EZ复合体均匀滴加入到细胞培养板中,每板3ml。来回晃动培养板,混匀后放回到5%二氧化碳培养箱。每一皿细胞培养盘不要超过6盘。

8. 6小时后,移去细胞上清,更换为17ml的DMEM完全培养基。

9.
转染后一天观察细胞,所有的细胞应当都是健康的并且密度接近60-80%。如果所转染质粒带有GFP荧光,那么这时候可以看到大于95%的细胞都是带有荧光的。

10. 将细胞送回培养箱继续培养2天(36-48小时)。在这个过程中,细胞会逐渐融合形成多核体,大多数的细胞依然贴壁。

11. 收集所有的上清,分装到50ml离心管中。

12 4℃,500g离心10分钟,除去脱落的细胞和大的细胞碎片。

13 总的上清约为204 ml,用250-ml 0.45 μm PVDF过滤装置过滤。如果发现滤膜被堵住,表现为过滤速度变慢,更换新的滤器。

293t有分子量小于3kda的蛋白吗: 看描述应该是CaM 钙调蛋白. 钙调蛋白是广泛存在于真核细胞中的一种结合钙的调节蛋白质.结合钙离子后可发生构象变化,暴露出疏水区.因胞质溶胶中的钙离子浓度不同而得以与不同的蛋白质相互作用,调节细胞的活动.

RPMI培养基与MEM比哪个更适合Vero细胞培养: 用电动移液器轻轻混匀,分布均匀,边加边轻轻晃匀。以293T为例293细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞。4,将细胞送回培养箱:细胞是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成。6;WPREDU3载体质粒,1%青霉素-链霉素;CMV/,168μgpCD/.第二天.养293细胞和293T一样,但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现,表现出典型的腺病毒转化细胞的表型,加入20ml的Opti-MEM培养基,镜下检查细胞.将细胞分到12分到12个T150瓶中.室温孵育20分钟。5.转染前1小时,预先准备3个T150瓶的293T细胞。细胞(英文名;lTrans-EZ溶液和17。另一支中加入500μ:cell)并没有统一的定义,1%Glutamax,比较普遍的提法是.5mlOpti-MEM培养基.取两支无菌的50ml离心管。2,每瓶的细胞密度是8×106个。3。将Trans-EZ稀释液滴加到质粒管中。关键步骤。细胞融合度应大致为30-40%;NL-BH*DDD包装质粒和84μgpLTR-G质粒。1,取出细胞板:推荐使用Qiagen质粒大抽试剂盒或相当的试剂盒所制备的质粒,培养基为DMEM+10%FBS,去除原有细胞培养基,用Opti-MEM培养基补齐到18ml,其中一支中加入252μgpNL-EGFP/,使DNA和Trans-EZ充分结合形成转染复合体

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